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細胞培養(yǎng)之支原體檢測方法~支原體常規(guī)PCR法

更新時間:2022-03-16  |  點擊率:882

細胞培養(yǎng)過程中,由于實驗環(huán)境、操作者鼻腔口腔、實驗器材等很多地方都有支原體的存在。因此,細胞發(fā)生支原體污染的頻率很高。據(jù)美國數(shù)據(jù)統(tǒng)計,細胞發(fā)生支原體污染的幾率在70%以上。

同時,由于支原體直徑很小,僅在180nm~350nm之間,只有通過電鏡才能看到。因此,支原體污染不易被實驗者肉眼發(fā)覺。而支原體污染是個循序的過程,普通抗生素對其無效。因此,被支原體污染的細胞會持續(xù)受到影響,導致實驗數(shù)據(jù)不準確。

支原體污染不僅是細胞培養(yǎng)中需要克服的現(xiàn)象,而且是制藥、生物制品生產(chǎn)中需要加以避免的。支原體污染的影響是什么?

細胞培養(yǎng)之支原體檢測方法~支原體常規(guī)PCR法



支原體常規(guī)PCR法其原理和熒光定量PCR是一樣的,根據(jù)支原體核糖體的特異保守序列設計引物,對待檢樣本DNA進行擴增,通過對擴增產(chǎn)物的大小分析作出判斷。

它的優(yōu)點是準確度很高,特別是德國MB的試劑盒,不僅qPCR的靈敏度可以達到10CFU/ml以上,普通PCR的靈敏度也可以達到各國藥典的這個要求。

特異性強,*涵蓋所有可能感染細胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體),根據(jù)序列一致性,至少可以檢測到107種支原體物種。與細菌和真核DNA無交叉反應。

操作比qPCR多了個跑電泳的步驟。

時間短,2-3小時可以出結(jié)果。




唯yi的限制,因為檢測的是支原體的DNA,所以無法區(qū)分活的支原體。但生物制品在生產(chǎn)過程中,本身不應該產(chǎn)生支原體污染,污染過也不行,所以這個限制反而變成了優(yōu)點。


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